尖銳濕疣是常見的一種傳染性疾病，迄今，HPV難于用傳統(tǒng)的病毒培養(yǎng)及血清學(xué)技術(shù)檢測，主要實(shí)驗(yàn)診斷技術(shù)是核酸雜交。近年來發(fā)展的PCR方法具有特異、敏感、簡便、快速等優(yōu)點(diǎn)，為HPV檢測開辟了新途徑。尖銳濕疣要怎么進(jìn)行診斷呢?我們看看下面的具體介紹。
(一)標(biāo)本的采集及處理
1.標(biāo)本的采集和預(yù)處理：用刮板或生理鹽水浸潤的棉棒從陰道和宮頸外口取分泌物和細(xì)胞。在作細(xì)胞學(xué)檢查的同時(shí)，將標(biāo)本放入5ml含有0.05%硫柳汞的PBS中，用PBS離心(3000g，10min)洗滌2次，沉積細(xì)胞重懸于1mlPBS中，取0.5ml細(xì)胞懸液抽提DNA。
2.標(biāo)本核酸的提?。喊?體積細(xì)胞懸液加10倍體積的細(xì)胞裂解液(10mmol/L Tris-HCl，pH 7.4，10mmol/L EDTA，150mmol/L NaCl，0.4%SDS，1.0mg/ml蛋白酶K)37℃下處理過夜;且等體積酚/氯仿(1:1)，氯仿/異戊醇(24:1)各抽提2次;加1/10體積3mol/L NaAc(pH 5.2)及2.5倍體積無水乙醇置-20℃ 2h或過夜沉淀DNA;加1體積乙醇洗滌1次;用60μl含RNA酶(100μg/ml)的TE液(10mmol/L Tris-HCl，pH 8.0，1.0mmol/L EDTA)溶解DNA，37℃溫育30min。
(二)PCR擴(kuò)增
1. 引物設(shè)計(jì)和合成：HPV基因組可分為早期區(qū)(E)和晚期區(qū)(L)，每區(qū)含一系列開放讀碼框架(ORF)。序列分析表明，各型HPV的非編碼區(qū)及E1、E6、E7和L1區(qū)均有保守序列。Manos等從HPVL1區(qū)中選擇保守序列設(shè)計(jì)合成引物MY11和MY09見表1，該引物與HPV 6、11、16、18及33型有互補(bǔ)序列，也可擴(kuò)增其它型HPV。