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介紹狂犬病的檢查項(xiàng)目

  狂犬病主要是感染了狂犬病毒所致,狂犬病毒含5種主要蛋白,即糖蛋白(G)、核蛋白(N)、聚合酶(L)、磷蛋白(NS)及膜蛋白(M)等。糖蛋白能與乙酰膽堿結(jié)合,決定了狂犬病毒的噬神經(jīng)性,能刺激抗體產(chǎn)生保護(hù)性免疫性反應(yīng)。N蛋白導(dǎo)致的抗體不具中和力,可用檢測(cè)漿內(nèi)包涵體有助臨床診斷。

  1.血液檢查:白細(xì)胞總數(shù)自(12~30)×109/L不等,中性粒細(xì)胞百分率大多在80%以上,大單核細(xì)胞百分率亦可增加。

  2. 尿常規(guī)檢查:??砂l(fā)現(xiàn)輕度蛋白尿,偶有透明管型。

  3.腦脊液檢測(cè):其壓力在正常范圍或稍有增高,蛋白質(zhì)輕度增高,細(xì)胞數(shù)稍增多,但很少超過(guò)200×106/L,主要為淋巴細(xì)胞。

  4.免疫學(xué)試驗(yàn):

  A)血清中和抗體或:對(duì)未注射過(guò)疫苗、抗狂犬病血清或免疫球蛋白者有診斷價(jià)值。缺點(diǎn)是在病程第8天前不易測(cè)出。接種過(guò)疫苗的患者,如中和抗體效價(jià)超過(guò)1∶5000時(shí),對(duì)診斷狂犬病仍有價(jià)值,因僅注射疫苗者其抗體效價(jià)較低。近來(lái)亦有采用ELISA進(jìn)行抗體檢測(cè)。

  B)熒光抗體測(cè)定:即狂犬病毒抗原檢測(cè)。應(yīng)用熒光抗體檢查腦組織涂片、角膜印片、冷凍皮膚切片中的病毒抗原,發(fā)病前即可獲得陽(yáng)性結(jié)果。方法簡(jiǎn)便,數(shù)小時(shí)內(nèi)可完成,且與小鼠腦內(nèi)接種檢查內(nèi)氏小體方法有較高的符合率,因此是實(shí)際應(yīng)用價(jià)值較大的一種試驗(yàn)。在有經(jīng)驗(yàn)的實(shí)驗(yàn)室中,免疫熒光試驗(yàn)的可靠性可達(dá)95%以上。最近采用快速狂犬病酶鏈免疫吸附診斷法(rapid rabies enzyme immuno diagnosis,RREID)可用于檢測(cè)腦組織中狂犬病毒抗原,只需肉眼觀察或酶標(biāo)儀測(cè)定結(jié)果即可,如陽(yáng)性反應(yīng)顯示橘黃色,陰性反應(yīng)則無(wú)色,甚為快速簡(jiǎn)便。

  5.病毒分離 從患者腦組織、脊髓、涎腺、淚腺、肌肉、肺、腎、腎上腺、胰腺等臟器和組織雖可分離到病毒,但機(jī)會(huì)均不多,自腦脊液和唾液中則更不易分離出病毒;患者的存活時(shí)間越長(zhǎng),病毒的分離也越困難。分離病毒可采用組織培養(yǎng)或動(dòng)物接種,分離出病毒后可用中和試驗(yàn)加以鑒定。

  6.腦組織動(dòng)物接種與檢查 均于死后進(jìn)行,動(dòng)物接種為將死者腦組織制成10%混懸液接種于小鼠腦內(nèi)(2~3周齡的乳鼠較成年鼠為敏感),陽(yáng)性者小鼠于6~8天內(nèi)出現(xiàn)震顫、豎毛、尾強(qiáng)直、麻痹等現(xiàn)象,10~15天內(nèi)因衰竭而死亡。死亡小鼠腦組織切片中可發(fā)現(xiàn)內(nèi)氏小體。

  以死者腦組織或咬人動(dòng)物死亡后的腦組織作病理切片或壓片,用Seller染色及直接免疫熒光法檢查內(nèi)氏小體,陽(yáng)性率可達(dá)70%。

  7.反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)檢測(cè)狂犬病毒核酸 為了能檢側(cè)大多數(shù)狂犬病毒和狂犬相關(guān)病毒,可選擇狂犬病毒核蛋白基因(N)中最保守區(qū)域設(shè)計(jì)引物:N1( )(587)5’-TTTTGAGACTGCTCCTTTTTG-3’(605),N2(-)(1029)5’-CCCATATAGCATCCTAC-3’(1013)。取腦組織或病毒感染細(xì)胞,先獲得病毒RNA。N1引物用于合成cDNA,然后進(jìn)行PCR反應(yīng),瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)結(jié)果。

  常規(guī)應(yīng)做X線胸片、B超、心電圖、腦CT檢查。

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