糖尿病腎病(DN)是糖尿病(Diabetes Mellitus, DM)的嚴重并發(fā)癥之一。隨著糖尿病發(fā)病率的增加,DN患者日益增多,因其發(fā)病隱蔽,進展緩慢,如果任其發(fā)展,當臨床上出現(xiàn)持續(xù)性蛋白尿時,腎臟病變已不屬早期,腎臟已出現(xiàn)了不可逆的病變,再用藥物也無法逆轉。因此,早期發(fā)現(xiàn)糖尿病腎病有其十分重要的意義。現(xiàn)簡要介紹三種糖尿病腎病的早期實驗診斷方法。
一、尿微量白蛋白檢測
(一)方法:競爭酶聯(lián)抑制法。
(二)實驗步聚:
1、用撲克制的抗菌素人白蛋白包被塑料板。
2、加入不同濃度的標準抗原或待測樣品,37℃溫育30分鐘。
3、加入底物溶液和終止液,通過酶標儀比色,即可算出待測標本濃度。
(三)結論:
此法快速簡便,非常適合臨床常規(guī)使用。但是其缺點是DM患者中尿微量白蛋白的陽性率較低,在Ⅱ型糖尿病病人中,陽性率不足20%。
二、尿銅藍蛋白檢測
(一)方法:酶聯(lián)免疫吸附測定法。
(二)實驗步驟:
1、銅藍蛋白抗體包被,冰箱過夜。
2、加入不同濃度的標準抗原或待測樣品,37℃溫育1小時。
3、加入酶標銅藍蛋白抗體,37℃溫育1小時。4、加入底物溶液和終止液,在酶標儀上讀取A值,即可算出待測標本濃度。
(三)結論:
該方法進行了精確性和穩(wěn)定性實驗,方法比較穩(wěn)定可靠。并對114名DM患者的尿銅藍蛋白含量及尿微量白蛋白含量進行相關分析,兩者呈正相關,且在尿微量白蛋白陰性的糖尿病病人中,仍有49。5%的病人尿銅藍蛋白陽性。因此,尿銅藍蛋白質檢測很有可能成為DN早期的較第三診斷指標。
三、尿白蛋白片段的檢測
(一)方法:免疫印跡法。
(二)實驗步驟:
1、尿樣與樣品處理液等量混合,置沸水浴3分鐘。2、聚丙烯酰胺凝膠電泳,每孔加樣20μι,電壓200V。3、將膠上的蛋白帶轉印到硝基纖維素膜上,轉印電流340mA,2小時后取出,封閉1小時。4、加入白蛋白抗體和酶標白蛋白,冰箱過夜。5、加入顯色液,出現(xiàn)蛋白帶為陽性,未見蛋白帶為陰性。
(三)結論:
通過實驗得出凡是尿白蛋白陽性者,尿白蛋白片段也為陽性,而尿白蛋白陰性者中,仍有30%為尿白蛋白片段陽性。曾有人對后者進行隨訪觀察,發(fā)現(xiàn)他們中有18%發(fā)展為尿白蛋白,蛋白陽性。因此,認為尿白蛋白片段具有更高的特異性和早期栓出率,能更早地發(fā)現(xiàn)DN患者。
綜上所述,除尿微量白蛋白檢測是目前人們較為公認的DN早期診斷指標外,其它兩種都還在觀察及研究中。目前國內外還沒有建立尿銅藍蛋白酶聯(lián)免疫測定方法,市場上買不到試劑盒,其作用機理還待于進一步深入研究。免疫印跡法分析尿白蛋白片段,在我院已應用于臨床,對尿白蛋白陰性者,再用本法檢測分析,可以更有效地避免早期糖尿病腎病的漏診,是預測腎臟病變的更為早期,更為靈敏的指標。