抗原抗體 抗原抗體的應用

  什么是抗原抗體呢,在我們生活中想必大家對于抗原抗體還是有所了解的吧,那么大家知道抗原抗體是什么嗎,抗原抗體反應是什么呢,抗原抗體結合原理是什么呢,下面就讓我們一起了解一下吧。

  抗原與相應抗體的特異性結合反應。這種反應可以在體內進行,也可以在身體之外進行。抗原抗體反應過程是一系列的化學和物理變化,包括抗體特異性結合和非特異性聚集的2個階段,以及親水性膠體對疏水性膠體的變化。

  特點

  比例性是指抗原與抗體發(fā)生可見反應需遵循一定的量比關系,只有當二者濃度比例適當時才出現(xiàn)可見反應,在抗原抗體比例相當或抗原稍過剩的情況下,反應徹底,形成的免疫復合物沉淀多、大。而當抗原抗體比例超過此范圍時,反應速度和沉淀物量都會迅速降低甚至不出現(xiàn)抗原抗體反應。

  可逆性是指抗原抗體結合形成復合物后,在一定條件下又可解離恢復為抗原與抗體的特性。由于抗原抗體反應是分子表面的非共價鍵結合,所形成的復合物并不牢固,可以隨時解離,解離后的抗原抗體仍保持原來的理化特征和生物學活性。

  應用

  免疫動物

  (1)抗原

  免疫動物是制備抗血清的第一步。所使用的抗原的免疫反應可以是病毒,細菌或其他蛋白質的抗原,如果使用半抗原如小分子,如激素,必須與大分子載體連接。不同類型的抗原和動物的抗原的量,注射小鼠可以作為一個小的幾微克,綿羊,甚至更大的動物,每一次相應的增加量,從幾百克/倍到幾毫克/倍。

  〔2)佐劑及乳化

  佐劑可以幫助抗原在注射部位緩慢釋放,以增加免疫刺激的效果。佐劑有完全和不完全佐劑之分。完全佐劑加有滅活的分枝桿菌(如卡介苗)或棒狀桿菌。福氏佐劑可從試劑公司購買,也可用羊毛脂和石蠟油按1:2—4混合自行制備。佐劑與抗原按1:1的比例混合乳化為均勻的乳液,放置后不會發(fā)生油水分離。

  (3)免疫動物

  常用于制備抗血清的動物打豚鼠、家免、小鼠、大鼠等,如果大量生產(chǎn)可用動物羊、馬等,動物接受免疫的乳液量小鼠為1.0—2.0mL,家兔為2—4mL??乖庖邉游锏耐緩饺Q于動物種類、抗原特性和是否使用佐劑。

  腹腔注射(i.p),肌肉注射(i.m),皮內注射(i.d.)和皮下注射(s.c.)適合于任何抗原,這些途徑主要刺激局部淋巴結發(fā)生免疫應答,初次免疫和免疫加強注射均可使用。靜脈注射(i.v.)則只適合于可溶性抗原及分散的單細胞懸液,且不能使用佐劑,其誘發(fā)的免疫應答主要發(fā)生在脾臟。

  此外,在單克隆抗體制備時,亦可用脾臟直接注射或體外免疫方法,尤其對微量抗原比較實用。體外免疫方法也常用于人源單克隆抗體的制備。體外免疫時將脾細胞或外周血淋巴細胞(包括B細胞,T細胞及抗原遞呈細胞)與抗原一起作體外培養(yǎng),然后再與骨髓瘤細胞融合。

  初次免疫后要經(jīng)過2—3次以上的免疫加強以保證能形成較高水平的IgC抗體。兩次免疫注射之間的時間間隔,一般3—4周比較適合大部分動物,小動物可間隔10—14d,大動物則在2月左右。在免疫加強后一次注射后的一周內采集抗血清,可獲得高水平的抗體。

  抗血清的純化與保存

  (1)采血

  加強免疫的動物2—3次后,可通過耳靜脈或眼球(小鼠)采血,進行抗血清效價測定。當效價達到理想的高度后,可以采血。采血方式可以從心臟直接取血,也可通過動脈放血。待血液凝固后用針筒或吸管吸取血清。

  (2)抗血清的純化與保存

  除抗體外血清中含有多種其他蛋白成分。為了避免這些蛋白質干擾抗體(免疫球蛋白)標記反應和抗原抗體反應,抗血清可經(jīng)過純化以獲得單一的機體(常為IgG)組分。常用的純化IgG的方法為飽和硫酸胺鹽析和層析法。

  蛋白質在不同的鹽濃度的溶液中,其溶解度不一樣,鹽離子干擾蛋白質和水分子間氫鍵形成,因為水—鹽結合比水—蛋白質結合更穩(wěn)定,蛋白質即可從溶液中沉淀出來。蛋白質分子越大,沉淀時所需鹽離子濃度越低。

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