成分測定
水分照水分測定法測定,不得過9.0%。
膽酸
取本品細粉約0.2g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加入甲醇50ml,密塞,稱定重量,超聲處理30分鐘,再稱定重量,用甲醇補足減失的重量,搖勻,濾過,精密量取續(xù)濾液25ml,蒸干,殘渣加20%氫氧化鈉溶液10ml,加熱回流2小時,冷卻,加稀鹽酸19ml調節(jié)pH至酸性,用醋酸乙酯提取4次(25ml、25ml、20ml、20ml),每次醋酸乙酯液均通過同一鋪有少量無水硫酸鈉的脫脂棉濾過,合并提取液,蒸干,殘渣加甲醇溶解并轉移至10ml量瓶中,加甲醇至刻度,搖勻,作為供試品溶液。
另精密稱取在105℃干燥至恒重的膽酸對照品,加甲醇制成每1ml含0.48mg的溶液,作為對照品溶液。
照薄層色譜法試驗,精密吸取供試品溶液2μl、對照品溶液1μl與3μl,分別交叉點于同一硅膠G薄層板上,以異辛烷-醋酸丁酯-冰醋酸-甲酸(8:4:2:1)為展開劑,展至14~17cm,取出,晾干,噴以30%硫酸乙醇溶液,在105℃加熱至斑點顯色清晰,取出,在薄層板上覆蓋同樣大小的玻璃板,周圍用膠布固定,照薄層色譜法進行掃描,波長:λ<[S]>=380nm,λ<[R]>=650nm,測量供試品吸收度積分值與對照品吸收度積分值,計算,即得。
本品按干燥品計算,含膽酸(C24H40O5)不得少于4.0%。
膽紅素
對照品溶液的制備,取膽紅素對照品約10mg,精密稱定,置100ml棕色量瓶中,加氯仿溶解并稀釋至刻度,搖勻,精密量取5ml,置50ml棕色量瓶中,加乙醇至刻度,搖勻,即得(每1ml中含膽紅素0.01mg)。
標準曲線的制備精密量取對照品溶液1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml,置具塞試管中,分別加乙醇至9ml,各精密加重氮化溶液(甲液:取對氨基苯磺酸0.1g,加鹽酸1.5ml與水適量使成100ml。
乙液:取亞硝酸鈉0.5g,加水使溶解成100ml,置冰箱內保存。
用時取甲液10ml與乙液0.3ml,混勻)1ml,搖勻,于15~20℃暗處放置1小時,以相應的試劑為空白,照分光光度法,在533nm的波長處測定吸收度,以吸收度為縱坐標,濃度為橫坐標,繪制標準曲線。
測定法取本品細粉約10mg,精密稱定,置錐形瓶中,加氯仿和乙醇(7:3)的混合溶液60ml、鹽酸1滴,搖勻,置水浴上加熱回流約30分鐘,放冷,移至100ml棕色量瓶中。
容器用少量混合溶液洗滌,并入量瓶中,加上述混合溶液至刻度,搖勻。
精密量取上清液10ml,置50ml棕色量瓶中,加乙醇至刻度,搖勻。
精密量取3ml,置具塞試管中,照標準曲線的制備項下的方法,自加乙醇至9ml起,依法測定吸收度,從標準曲線上讀出供試品溶液中膽紅素的重量(mg),計算,即得。
本品按干燥品計算,含膽紅素(C33H36N4O6)不得少于35.0%。